讨论]:梯度还是等度?

发布者:admin 发布时间:2019-10-25 18:25 浏览次数:

  一般待测样各组分间极性相差不是很大,保留时间的差别也就不大,用等度就可以了。相反的情况就可以考虑是不是可以用梯度了。

  首先在t min 内,进行由5%~100%乙腈-水溶液的线mL/min,乙腈的梯度陡度可控制在2~4%内),出峰以后第一个和最后一个出峰组分的保留时间差记为T min,如 t/T=0.25,进行等度洗脱;t/T0.25,应进行梯度洗脱

  在梯度洗脱中流动相的pH值,加缓冲盐与否以及缓冲盐的种类都会对洗脱有很大的影响。陡度太大,基线漂移就会比较严重,同一洗脱体系用乙腈比用甲醇基线要好;缓冲盐在所选波长处应无吸收或吸收很小,在低波长处,缓冲盐一般用磷酸盐,在高波长处,多用醋酸盐。

  梯度洗脱中柱子的平衡很重要,宁可多花点时间平衡柱子跑出好的结果,所以梯度洗脱时,平衡柱子的时间往往比进样走梯度的时间多。梯度的条件一般需要不断摸索,尤其是新的,少文献报道的待测样,

  其实如果作新药和西药只做一两个化合物,是等度洗脱好,速度快,但也并非越快越好,特别在分析生物样品时,考虑到基质效应,保留因子控制在2-3左右最好!

  梯度洗脱适合分析多个结构不同的样品及化合物与代谢产物一同鉴定的时候,比如苷和苷元的一同测定,另外很多做合成化学的分析实验室用的也是一通用的梯度洗脱方法,一个方法搞定大部分样品。

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